Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 15: sc-415722-ACT

RAB15 codifica Rab 15, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que regula el tráfico de membranas endosomales alternando entre los estados unidos a GDP y a GTP y coordinando la gemación, el transporte y la fusión de vesículas. La actividad de Rab 15 se ha vinculado con la endocitosis de receptores y con decisiones de clasificación (sorting) que determinan la amplitud de la señalización y la captación de nutrientes, conectando con procesos dependientes de Rab como el reciclaje endocítico y el direccionamiento hacia lisosomas. A través de su papel en la dinámica endosomal, Rab 15 puede influir en vías que gobiernan el metabolismo celular, la homeostasis de los receptores de membrana y la transducción de señales específica de compartimentos. La expresión o función alteradas de proteínas Rab endocíticas, incluida Rab 15, se investigan con frecuencia en contextos como la reconfiguración de la señalización oncogénica, la neurobiología y la regulación de células inmunitarias, donde son destacados los fenotipos dependientes del tráfico.

Rab 15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 15 en células tumorales con expresión de RAB15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.