R-Spondin2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402648-LAC

O gene humano **RSPO2** codifica a **R-Spondin2**, um ligante matricelular secretado que potencializa a sinalização canônica **WNT/β-catenina** ao ligar-se aos receptores **LGR4/5/6** e antagonizar as ligases de ubiquitina **RNF43/ZNRF3**, estabilizando assim os receptores **Frizzled** na superfície celular. Por meio desse mecanismo, a R-Spondin2 regula a manutenção e a proliferação de células-tronco epiteliais e a morfogênese tecidual, com efeitos a jusante sobre programas transcricionais que controlam a diferenciação e o destino celular. A atividade de RSPO2 interage com vias que governam a remodelação da matriz extracelular e o padrão de desenvolvimento, e a expressão alterada tem sido associada à desregulação da sinalização WNT em cânceres, bem como a papéis em fenótipos congênitos e inflamatórios em sistemas experimentais. Essas características tornam o RSPO2 um ponto útil para dissecar o ajuste fino da via WNT, a dinâmica receptor–ligante e saídas de sinalização dependentes do contexto em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais R-Spondin2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RSPO2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais R-Spondin2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RSPO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de R-Spondin2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RSPO2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.