Plasmide CRISPR/Cas9 KO QP-C (m): sc-423624

Présentation

Uqcrq code QP-C, une petite sous-unité accessoire du complexe III de la chaîne respiratoire mitochondriale (ubiquinol–cytochrome c réductase) qui favorise l’assemblage et la stabilité du complexe cytochrome bc1 dans la membrane interne mitochondriale. En influençant le transfert d’électrons de l’ubiquinol vers le cytochrome c, QP-C contribue à la phosphorylation oxydative, au maintien du potentiel de membrane mitochondriale et à l’équilibre rédox cellulaire. Une perturbation des composants du complexe III peut altérer la production d’ATP et augmenter les espèces réactives de l’oxygène (ROS) mitochondriales, reliant ainsi les processus dépendants d’Uqcrq aux réponses au stress bioénergétique et à la signalisation de l’apoptose. Dans les systèmes murins, Uqcrq est donc pertinent pour des études mécanistiques du dysfonctionnement mitochondrial dans des tissus à forte activité métabolique et pour modéliser des voies impliquées dans des phénotypes neuromusculaires et cardiométaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO QP-C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Uqcrq dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Uqcrq, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Uqcrq à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine QP-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Uqcrq pour l'étude de la signalisation de QP-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Uqcrq essentiels à la fonction de QP-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Uqcrq pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le QP-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le QP-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Uqcrq. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le QP-C plasmide HDR (m) et le QP-C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Uqcrq pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Uqcrq définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.