Plásmido CRISPR de Activación (m) Qa-1: sc-420781-ACT

El gen murino H2-T23 codifica la molécula no clásica del MHC de clase I Qa-1, una glucoproteína de superficie que regula la vigilancia inmunitaria al modelar las respuestas de las células NK y de los linfocitos T CD8+. Qa-1 presenta un repertorio peptídico restringido, incluidos péptidos derivados de secuencias líder, y transmite señales a través de receptores como CD94/NKG2 en células NK para modular la citotoxicidad y la tolerancia. Mediante estas interacciones, Qa-1 influye en la dinámica de la presentación de antígenos, la homeostasis inmunitaria y las respuestas a la inflamación. La alteración de la expresión de Qa-1 o de su reconocimiento se ha asociado con una inmunidad desregulada y se investiga con frecuencia en modelos de autoinmunidad, infección y evasión inmunitaria tumoral.

Qa-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de H2-T23 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Qa-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus H2-T23 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional H2-T23, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Qa-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo H2-T23 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Qa-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Qa-1 en células tumorales con expresión de H2-T23 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.