Plasmide Double Nickase (h) PYST2: sc-404642-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PYST2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PYST2 Double Nickase (h) et le plasmide PYST2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DUSP7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PYST2 Antibody (D-8): sc-377106
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PYST2 | sc-404642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PYST2 | sc-404642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La phosphatase à double spécificité 7 (DUSP7), également connue sous le nom de PYST2, est une phosphatase dirigée contre les MAPK qui déphosphoryle préférentiellement ERK1/2 et l’inactive, modulant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation induite par les mitogènes. En assurant une rétroaction négative au sein de la cascade Ras–Raf–MEK–ERK, DUSP7 contribue à réguler la prolifération, la différenciation et des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Une expression ou une activité altérée de DUSP7 a été associée à une dérégulation de la sortie de la voie MAPK dans les cancers et dans d’autres contextes où la signalisation ERK gouverne les décisions de destinée cellulaire, ce qui en fait un nœud utile pour les études mécanistiques de la plasticité de signalisation. Dans des modèles de cellules humaines, l’étude de la fonction de DUSP7 peut préciser comment l’atténuation médiée par les phosphatases influence des effecteurs en aval, notamment les gènes de réponse immédiate et les régulateurs du cycle cellulaire.
PYST2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUSP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUSP7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUSP7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUSP7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.