Plasmide CRISPR d'Activation (h) PYGB: sc-406294-ACT

Le gène humain **PYGB** code l’isoforme cérébrale de la glycogène phosphorylase, une enzyme limitante qui catalyse la dégradation du glycogène afin de générer du glucose-1-phosphate et de maintenir l’approvisionnement énergétique des cellules. En reliant la mobilisation du glycogène à la glycolyse et, plus largement, au métabolisme des glucides, **PYGB** favorise la flexibilité métabolique lorsque la disponibilité en nutriments ou en oxygène fluctue. L’activité de **PYGB** s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation qui ajustent l’homéostasie énergétique, notamment la détection AMP/ATP et des voies de réponse au stress qui influencent la survie et la prolifération cellulaires. Une dérégulation du métabolisme du glycogène et des modifications de l’expression de **PYGB** ont été observées dans des contextes d’adaptation métabolique et de reprogrammation de l’utilisation de l’énergie associée au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la bioénergétique.

PYGB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PYGB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PYGB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PYGB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PYGB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PYGB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PYGB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PYGB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PYGB dans les cellules tumorales présentant une expression de PYGB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.