Plásmido CRISPR de Activación (m) PTPσ: sc-422531-ACT

El gen murino *Ptprs* codifica la fosfatasa de tirosina proteica sigma (PTPσ), una fosfatasa de tipo receptor enriquecida en contextos neuronales y epiteliales que integra señales de la matriz extracelular con eventos intracelulares de desfosforilación para modular la adhesión celular, el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la organización sináptica. PTPσ interactúa con proteoglicanos de heparán sulfato y condroitín sulfato, conectando la matriz pericelular con la remodelación del citoesqueleto y con módulos de señalización que influyen en el comportamiento del cono de crecimiento y la plasticidad de los circuitos. Mediante la modulación de vías dependientes de fosforilación, *Ptprs* contribuye a la señalización dependiente de contacto y al patrón tisular, y en la literatura se ha asociado la alteración de la actividad de PTPσ con fenotipos del neurodesarrollo, regeneración deficiente y una comunicación célula–célula desregulada. Estas características convierten a *Ptprs* en una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización controlada por fosfatasas en la conectividad neuronal y la regulación del microambiente.

PTPσ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ptprs sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTPσ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ptprs en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ptprs, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTPσ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ptprs y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTPσ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTPσ en células tumorales con expresión de Ptprs silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.