Plásmido CRISPR de Activación (m) PSS1: sc-422474-ACT

El gen Ptdss1 de ratón codifica la fosfatidilserina sintasa 1 (PSS1), una enzima de membrana del retículo endoplásmico que cataliza la biosíntesis de fosfatidilserina mediante reacciones de intercambio de bases, configurando el panorama de fosfolípidos celulares. La fosfatidilserina favorece la curvatura de la membrana y la función de los sitios de contacto entre orgánulos, y su distribución asimétrica contribuye al tráfico vesicular, la señalización apoptótica y el reconocimiento inmunitario de células moribundas. A través de su papel en la homeostasis lipídica, PSS1 influye en la función mitocondrial, la autofagia y redes más amplias de señalización lipídica que se conectan con respuestas al estrés y la remodelación metabólica. La desregulación del metabolismo de la fosfatidilserina se ha vinculado con fenotipos neurológicos y metabólicos, lo que convierte a Ptdss1 en un nodo útil para desentrañar mecanismos dependientes de lípidos en modelos relevantes para enfermedad.

PSS1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ptdss1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSS1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ptdss1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ptdss1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ptdss1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSS1 en células tumorales con expresión de Ptdss1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.