Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSMC4: sc-403885-ACT

PSMC4 code une sous-unité ATPase AAA+ de la particule régulatrice 19S du protéasome 26S, participant à la reconnaissance, au dépliement et à la translocation des substrats polyubiquitinylés vers le cœur catalytique. Par ce rôle dans le système ubiquitine–protéasome, PSMC4 contribue à la protéostasie, au renouvellement des régulateurs du cycle cellulaire, à la modulation des réponses au stress et au contrôle de programmes transcriptionnels influencés par la stabilité des protéines. L’activité du protéasome s’articule avec des voies telles que la signalisation NF-κB, les réponses aux dommages de l’ADN et les réponses adaptatives au stress protéotoxique, ce qui rend PSMC4 pertinent pour l’étude de la prolifération et de l’homéostasie cellulaire. Une régulation anormale du protéasome et une expression altérée de ses sous-unités ont été associées à des états oncogéniques et à des défauts de protéostasie liés à la neurodégénérescence, ce qui justifie l’étude de PSMC4 dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

PSMC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMC4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMC4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMC4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMC4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMC4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMC4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMC4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMC4 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMC4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.