Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSKH1: sc-410963-ACT

PSKH1 (protein serine kinase H1) est une protéine kinase sérine/thréonine conservée, impliquée dans la régulation de la signalisation cellulaire et dans le contrôle des fonctions protéiques dépendant de la phosphorylation. Elle a été associée à des processus tels que la progression du cycle cellulaire et la signalisation en réponse au stress, via la modulation de réseaux gouvernés par des kinases qui coordonnent la prolifération et l’adaptation. Il a également été rapporté que PSKH1 humaine se localise dans des compartiments nucléaires, ce qui concorde avec des rôles dans le contrôle de programmes d’expression génique et de voies associées au traitement de l’ARN. Des altérations de la signalisation des kinases et des cascades de phosphorylation dérégulées sont fréquemment observées dans des états cellulaires pertinents pour la maladie, faisant de PSKH1 une cible utile pour des études mécanistiques du remodelage des voies dans des phénotypes complexes.

PSKH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSKH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSKH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSKH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSKH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSKH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSKH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSKH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSKH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSKH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.