Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSGL-1: sc-401534-ACT

SELPLG code le ligand 1 de la glycoprotéine P-sélectine (PSGL-1), un récepteur d’adhésion de type mucine fortement exprimé à la surface des leucocytes, qui médie l’accrochage initial et le roulement sur l’endothélium activé via sa liaison aux sélectines. PSGL-1 associe des motifs de reconnaissance dépendants de la glycosylation à une signalisation intracellulaire afin de coordonner le trafic leucocytaire, la formation de la synapse immunologique et le recrutement inflammatoire. Cet axe interfère avec l’inflammation vasculaire et la régulation de l’immunité innée et adaptative, en influençant des voies qui modulent les réponses cytokiniques et les interactions cellule–cellule. Un dérèglement de la fonction et de l’expression de SELPLG/PSGL-1 a été associé à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, ainsi qu’à la dynamique du microenvironnement tumoral et immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques en immunologie et en oncologie.

PSGL-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SELPLG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSGL-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SELPLG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SELPLG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSGL-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SELPLG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSGL-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSGL-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SELPLG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.