Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSF: sc-402024-ACT

Le gène humain **SFPQ** code la protéine **PSF**, un facteur nucléaire multifonctionnel se liant à l’ARN et à l’ADN, qui coordonne la régulation transcriptionnelle, l’épissage du pré-ARNm et la maturation de l’extrémité 3′ des ARN. PSF participe à la dynamique des paraspeckles et des corps nucléaires grâce à des interactions avec des ARN longs non codants et des partenaires liant l’ARN, modulant ainsi des programmes d’expression génique en réponse au stress et aux signaux de différenciation. Elle contribue également au maintien du génome en influençant la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN et le choix des voies de réparation, établissant un lien entre le traitement de l’ARN et des processus associés à la chromatine. Une dérégulation des complexes ribonucléoprotéiques associés à SFPQ/PSF a été rapportée dans des contextes impliquant une altération de la fidélité de l’épissage, une instabilité génomique et un contrôle transcriptionnel aberrant, des thématiques fréquemment étudiées en recherche sur le cancer et les maladies neurodégénératives.

PSF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFPQ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFPQ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFPQ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFPQ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSF dans les cellules tumorales présentant une expression de SFPQ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.