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PSD-95双切口酶质粒(h) | sc-400830-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSD-95双切口酶质粒(h2) | sc-400830-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLG4 编码 PSD-95(突触后致密物蛋白 95),它是一种重要的 MAGUK 类支架蛋白,主要通过在突触后致密区聚集 NMDA 受体、AMPA 受体复合体及相关信号蛋白来组织兴奋性突触。PSD-95 依靠其 PDZ、SH3 和 GK 结构域调控突触成熟、受体转运以及活动依赖性的可塑性,将谷氨酸能传递与下游通路相连接,从而影响树突棘结构和钙依赖性信号传导。以 PSD-95 为核心的复合体一旦受到扰动,往往与突触连接方式和神经网络兴奋性的改变相关,因此 DLG4 常被用作研究神经发育及神经精神疾病机制的关键分子切入点。在人源神经元模型中,DLG4 的功能也经常被用来解析突触装配、兴奋/抑制平衡以及受体—支架信号动态等问题。
PSD-95 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 DLG4 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对DLG4内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏DLG4的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了DLG4基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。