PRX VI CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401549-ACT

PRDX6 kodiert Peroxiredoxin VI (PRX VI), ein bifunktionelles antioxidatives Enzym mit Glutathionperoxidase-Aktivität und calciumunabhängiger Phospholipase-A2-Aktivität, das die Entgiftung von Wasserstoffperoxid sowie die Reparatur oxidierter Membranphospholipide unterstützt. Durch die Regulation des Redoxgleichgewichts und des Phospholipid-Umsatzes beeinflusst PRX VI zelluläre Antworten auf oxidativen Stress, Lipidperoxidation und inflammatorische Signalwege und greift dabei in Signalwege ein, die Apoptose, Proteostase und mitochondriale Funktion modulieren. Eine veränderte PRDX6-Expression und PRX VI-Aktivität wurden mit Redox-Dysregulation in der Krebsbiologie, mit Stoffwechsel- und Herz-Kreislauf-Erkrankungen sowie mit neurodegenerativen Prozessen in Verbindung gebracht, bei denen oxidativer Schaden und Membranschädigung zentrale Merkmale sind.

PRX VI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDX6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRX VI Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDX6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDX6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRX VI-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDX6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRX VI-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRX VI-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDX6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.