PROT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408452

Descripción general

SLC6A7 codifica PROT (transportador de prolina), un transportador de la membrana plasmática dependiente de sodio y cloruro de la familia SLC6 que media la captación de L‑prolina con alta afinidad. Al controlar la disponibilidad intracelular de prolina, PROT puede influir en la homeostasis de aminoácidos, el equilibrio redox y el acoplamiento metabólico con vías como el ciclo del glutamato y la bioenergética mitocondrial, en particular en tejidos neuronales donde el manejo de la prolina está estrechamente regulado. Las alteraciones del transporte y del metabolismo de la prolina se han vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos debido a sus efectos sobre la neurotransmisión y las respuestas de estrés celular. Por lo tanto, SLC6A7 es relevante para el estudio de la biología de transportadores, la señalización dependiente de aminoácidos y los mecanismos que conectan el flujo de prolina con la función neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PROT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC6A7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC6A7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC6A7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PROT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC6A7 para la investigación de la señalización de PROT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC6A7 críticos para la función de PROT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC6A7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PROT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PROT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC6A7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PROT (h) y el plásmido HDR PROT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC6A7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC6A7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.