Plasmide CRISPR d'Activation (m) PRL-R: sc-422418-ACT

Le gène murin *Prlr* code le récepteur de la prolactine (PRL-R), un membre de la superfamille des récepteurs aux cytokines qui transmet les signaux de la prolactine afin de réguler le développement de la glande mammaire, la lactation, la fertilité, l’homéostasie métabolique et la modulation immunitaire. Après liaison du ligand, PRL-R active la signalisation JAK2/STAT5 et engage les voies PI3K/AKT et MAPK pour contrôler des programmes transcriptionnels qui gouvernent la différenciation cellulaire, la survie et la réactivité endocrinienne. Une activité altérée de PRLR a été associée à des phénotypes reproductifs et métaboliques dérégulés, ainsi qu’à des contextes de signalisation proliférative pertinents pour la biologie mammaire et l’inflammation. En tant que nœud intégrant des signaux endocriniens à des réseaux transcriptionnels en aval, PRL-R est fréquemment étudié dans des travaux portant sur la diaphonie hormonale et la régulation génique spécifique des tissus.

PRL-R Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Prlr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRL-R Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Prlr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Prlr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRL-R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Prlr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRL-R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRL-R dans les cellules tumorales présentant une expression de Prlr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.