PRH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406292

Descripción general

PRH2 (proteína rica en prolina, subfamilia 2 de HaeIII) codifica una proteína salival secretada, rica en prolina, que se expresa principalmente en las glándulas salivales y se libera en la cavidad oral. Las proteínas derivadas de PRH2 contribuyen a la composición y a las propiedades fisicoquímicas de la saliva, favoreciendo la lubricación, la formación de la película adquirida del esmalte y las interacciones con componentes de la dieta y con la microbiota oral. La variación en las proteínas salivales ricas en prolina se ha estudiado en el contexto de las interacciones huésped–microbio, la ecología oral y la susceptibilidad a afecciones inflamatorias orales, donde la unión de proteínas a superficies y la adhesión microbiana pueden influir en procesos inmunitarios y de barrera locales. Como factor secretado de alta expresión en un contexto de expresión restringida a un tejido, PRH2 ofrece un modelo útil para analizar la regulación génica de la secreción y la función proteica en sistemas epiteliales orales y glandulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRH2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRH2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRH2 para la investigación de la señalización de PRH2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRH2 críticos para la función de PRH2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRH2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PRH2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRH2 (h) y el plásmido HDR PRH2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.