Pre-TCRα Lentiviral Activation Particles (m): sc-422473-LAC

Ptcra kodiert die murine Prä‑T‑Zellrezeptor‑Alpha‑Kette (Prä‑TCRα), einen essenziellen Bestandteil des Prä‑TCR‑Komplexes, der mit der TCRβ‑Kette paart, um die frühe Entwicklung von Thymozyten zu steuern. Die Prä‑TCRα‑Signalgebung fördert am β‑Selektions‑Checkpoint Überleben und Proliferation, unterstützt den Übergang von doppelt negativen zu doppelt positiven Thymozyten und koordiniert die allelische Exklusion während der TCRβ‑Rearrangierung. Dieser Signalweg ist mit der proximalen TCR‑Signalkaskade verknüpft, einschließlich LCK/ZAP70 sowie nachgeschalteten MAPK‑ und NF‑κB‑Programmen, und prägt so die Lineage‑Festlegung und die Repertoirebildung. Eine fehlregulierte PTCRA‑assoziierte Signalgebung ist relevant für Studien zur aberranten Thymozytenselektion, zu Immundefizienz‑Phänotypen und zu Mechanismen der T‑linienbezogenen Leukämogenese in Mausmodellen.

Pre-TCRα Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ptcra-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pre-TCRα Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ptcra-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pre-TCRα-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ptcra-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.