Plasmide Double Nickase (h) Pre-TCRα: sc-417210-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Pre-TCRα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Pre-TCRα Double Nickase (h) et le plasmide Pre-TCRα Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PTCRA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Pre-TCRα | sc-417210-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Pre-TCRα | sc-417210-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTCRA code la pré‑chaîne alpha du récepteur des lymphocytes T (pré‑TCRα) chez l’humain, une chaîne de substitution invariante qui s’associe à TCRβ pour former le complexe pré‑TCR au cours des premières étapes du développement des thymocytes. La signalisation du pré‑TCRα coordonne la β‑sélection, en favorisant la survie, la prolifération et la différenciation des thymocytes via des voies comprenant des cascades dépendantes de LCK/ZAP70, avec en aval l’activation de MAPK/ERK, de NF‑κB et de PI3K‑AKT. Ce point de contrôle régule l’exclusion allélique de TCRβ et la progression des stades double négatif vers double positif, façonnant ainsi le répertoire émergent des lymphocytes T. Une expression dérégulée de PTCRA ou une signalisation anormale du pré‑TCR a été impliquée dans des altérations du développement lymphoïde et est fréquemment étudiée dans le contexte d’une différenciation aberrante de la lignée T et de programmes de signalisation associés aux leucémies.
Pre-TCRα Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTCRA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTCRA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTCRA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTCRA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.