PRAMEF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417298

Descripción general

PRAMEF6 (miembro 6 de la familia de antígenos expresados preferentemente en melanoma, por sus siglas en inglés) es una proteína de la familia PRAME específica de primates, con una expresión muy restringida en tejidos normales y una desrepresión frecuente en cánceres, en consonancia con la biología de los antígenos cáncer/testículo. Aunque PRAMEF6 está menos caracterizada funcionalmente que PRAME, las proteínas de la familia PRAME se han implicado en la regulación transcripcional y epigenética y se han asociado con la modulación de la señalización del receptor de ácido retinoico y de programas de diferenciación celular. La expresión alterada de genes de la familia PRAME se vincula con la proliferación de células tumorales, el reconocimiento inmunitario y la identidad de linaje, lo que convierte a PRAMEF6 en un marcador útil y en una diana mecanística para estudiar estados transcripcionales oncogénicos. Las aplicaciones de investigación incluyen perfilar redes de expresión génica dependientes de PRAMEF6 e investigar mecanismos reguladores que permiten su activación aberrante en contextos malignos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRAMEF6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRAMEF6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRAMEF6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRAMEF6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRAMEF6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRAMEF6 para la investigación de la señalización de PRAMEF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRAMEF6 críticos para la función de PRAMEF6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRAMEF6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRAMEF6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRAMEF6 (h) y el plásmido HDR PRAMEF6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRAMEF6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRAMEF6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.