Plasmide CRISPR/Cas9 KO PPOX (m): sc-422376

Présentation

Le gène murin **Ppox** code la protoporphyrinogène oxydase (PPOX), une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui catalyse l’oxydation de la protoporphyrinogène IX en protoporphyrine IX lors des étapes terminales de la biosynthèse de l’hème. En contrôlant le flux au sein de la voie des porphyrines, la PPOX soutient la production d’hémoprotéines nécessaires à la phosphorylation oxydative, au fonctionnement des cytochromes et à l’homéostasie rédox cellulaire. Une altération de l’activité de la PPOX peut perturber le métabolisme mitochondrial et augmenter les intermédiaires porphyriniques, reliant ainsi ce nœud du métabolisme de l’hème aux porphyries associées à la photosensibilité et, plus largement, à des phénotypes de stress oxydant. **Ppox** est donc pertinent pour l’étude de la bioénergétique mitochondriale, des programmes de différenciation érythroïde et du dialogue métabolique entre la disponibilité en hème et la gestion des espèces réactives de l’oxygène.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PPOX (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppox dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppox, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppox à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PPOX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppox pour l'étude de la signalisation de PPOX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppox essentiels à la fonction de PPOX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppox pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PPOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PPOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppox. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PPOX plasmide HDR (m) et le PPOX (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppox pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppox définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.