PPARγ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422363-ACT

O Pparg de camundongo codifica o receptor gama ativado por proliferadores de peroxissoma (PPARγ), um receptor nuclear ativado por ligante que atua como regulador transcricional do metabolismo de lipídios, da diferenciação de adipócitos e da homeostase da glicose. O PPARγ integra sinais metabólicos para controlar programas gênicos envolvidos na captação e no armazenamento de ácidos graxos, na sinalização de adipocinas, na função mitocondrial e no tônus inflamatório, por meio de interações com as vias associadas à insulina/PI3K-AKT, AMPK e NF-κB. Alterações na atividade de Pparg são amplamente usadas como ponto de entrada mecanístico para estudar desregulação metabólica, remodelamento do tecido adiposo e fenótipos inflamatórios em sistemas celulares de camundongo.

PPARγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pparg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PPARγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pparg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pparg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PPARγ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pparg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PPARγ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PPARγ em células tumorais com expressão de Pparg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.