PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422387

Übersicht

Ppp3r2 kodiert die regulatorische B2‑Untereinheit von Calcineurin (PP2B), einer Ca2+/Calmodulin‑abhängigen Serin/Threonin‑Phosphatase, die in Abhängigkeit von intrazellulären Calciumflüssen die Signalstärke und die Substratspezifität feinabstimmt. PP2B‑B2 ist an Ca2+-getriebenen Dephosphorylierungsprogrammen beteiligt, die transkriptionelle Outputs wie die NFAT‑Signalgebung sowie synaptische Plastizität, Zytoskelett‑Remodeling und andere calciumsensitive Prozesse steuern. Indem PPP3R2 die Phosphorylierungszustände über zahlreiche Zielproteine hinweg prägt, beeinflusst es die zelluläre Anpassung an Stimulation in erregbaren und nicht erregbaren Geweben. Eine Fehlregulation der Calcineurin‑Signalgebung wird mit Immun- und Entzündungswegen sowie mit neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die auf einer veränderten Calciumhomöostase beruhen, wodurch PPP3R2 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen dieser Prozesse darstellt.

Das PP2B-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp3r2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp3r2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp3r2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP2B-B2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp3r2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP2B-B2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppp3r2-Exone abzielen, die für die PP2B-B2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp3r2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PP2B-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP2B-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp3r2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP2B-B2 HDR-Plasmid (m) und PP2B-B2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp3r2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp3r2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.