Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m): sc-422383
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PP2B-Aα Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PP2B-Aα, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PP2B-Aα Antibody (D-9): sc-17808
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m) | sc-422383 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ppp3ca code la sous-unité catalytique Aα de la phosphatase protéique 2B (PP2B-Aα/calcineurine), une phosphatase sérine/thréonine dépendante du Ca²⁺/de la calmoduline qui couple les signaux calciques intracellulaires à des programmes transcriptionnels et cytosquelettiques. Dans les cellules de souris, la calcineurine déphosphoryle des substrats clés tels que les facteurs de transcription NFAT, modulant l’expression génique dépendante du calcium, la signalisation immunitaire et des processus neuronaux dépendants de l’activité, notamment la plasticité synaptique. PP2B-Aα intervient dans des voies contrôlant la régulation des canaux ioniques, l’adaptation mitochondriale et métabolique, ainsi que des réseaux de signalisation sensibles au stress. Une activité de la calcineurine dérégulée a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une activation altérée des cellules immunitaires, à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à un remodelage cardiaque et des muscles squelettiques inadapté.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp3ca dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp3ca, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp3ca à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2B-Aα.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp3ca pour l'étude de la signalisation de PP2B-Aα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp3ca essentiels à la fonction de PP2B-Aα
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp3ca pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PP2B-Aα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP2B-Aα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp3ca. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PP2B-Aα plasmide HDR (m) et le PP2B-Aα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp3ca pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp3ca définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.