Plásmido CRISPR de Activación (h) PP2A-B56-γ: sc-402726-ACT

PPP2R5C codifica la subunidad reguladora B56γ de la fosfatasa de proteínas 2A (PP2A), una importante fosfatasa de serina/treonina que dirige la actividad catalítica hacia sustratos específicos y localizaciones subcelulares concretas. PP2A-B56γ contribuye al control de la progresión del ciclo celular, la señalización de daño en el ADN, la fidelidad del punto de control mitótico y la transducción de señales a través de vías como PI3K–AKT, MAPK y Wnt/β-catenina, coordinando la desfosforilación de reguladores clave. La alteración de la expresión de PPP2R5C o de la composición del holoenzima PP2A puede modificar redes de fosforilación que influyen en la proliferación, la estabilidad del genoma y las respuestas al estrés. Estas propiedades hacen de PP2A-B56γ un nodo útil para estudiar el aislamiento de vías guiado por fosfatasas y los mecanismos que vinculan la desfosforilación desregulada con fenotipos asociados a enfermedades.

PP2A-B56-γ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP2R5C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PP2A-B56-γ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP2R5C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP2R5C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PP2A-B56-γ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP2R5C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PP2A-B56-γ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PP2A-B56-γ en células tumorales con expresión de PPP2R5C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.