Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Aβ (m): sc-428621

Présentation

Ppp2r1b code pour la sous-unité d’échafaudage PP2A-Aβ de la protéine phosphatase 2A, un complexe phosphatase central sérine/thréonine qui organise les sous-unités catalytiques et régulatrices afin de contrôler la spécificité des substrats et la localisation. La signalisation de PP2A façonne des processus dépendants de la phosphorylation, notamment la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la dynamique du cytosquelette et la modulation des voies MAPK/AKT. En ajustant les événements de déphosphorylation à travers de multiples réseaux, PP2A-Aβ influence l’homéostasie cellulaire et l’adaptation au stress dans divers tissus. La dérégulation des sous-unités de PP2A, y compris des composants d’échafaudage, a été associée à une altération des signaux prolifératifs et de la stabilité du génome, ce qui étaye sa pertinence dans les études mécanistiques des états de signalisation associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Aβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp2r1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp2r1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp2r1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2A-Aβ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp2r1b pour l'étude de la signalisation de PP2A-Aβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp2r1b essentiels à la fonction de PP2A-Aβ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp2r1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP2A-Aβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP2A-Aβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp2r1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP2A-Aβ plasmide HDR (m) et le PP2A-Aβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp2r1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp2r1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.