POU2F3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417495

Descripción general

POU2F3 codifica un factor de transcripción con dominio POU que regula programas de expresión génica específicos de linaje en células epiteliales, con funciones destacadas en la diferenciación y el mantenimiento de estados especializados de células tuft/brush (en penacho/cepillo). Al unirse a motivos tipo octámero y coordinar redes transcripcionales, POU2F3 influye en la identidad epitelial, la señalización asociada a funciones sensoriales y procesos relacionados con la barrera mucosa. Las alteraciones en la actividad de POU2F3 se han vinculado con la plasticidad de linaje y con dependencias transcripcionales específicas de subtipos en ciertos cánceres derivados del epitelio, incluidas variantes del cáncer de pulmón de células pequeñas. Como regulador maestro, se estudia con frecuencia en el contexto del control del destino celular impulsado por la cromatina y la reconfiguración de los circuitos de factores de transcripción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POU2F3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POU2F3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POU2F3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POU2F3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POU2F3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POU2F3 para la investigación de la señalización de POU2F3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POU2F3 críticos para la función de POU2F3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POU2F3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POU2F3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido POU2F3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POU2F3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POU2F3 (h) y el plásmido HDR POU2F3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POU2F3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POU2F3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.