Polycystin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400669

Übersicht

PKD2 kodiert Polycystin-2, einen Ca2+-durchlässigen, nichtselektiven Kationenkanal der TRP-Familie, der in primären Zilien, dem endoplasmatischen Retikulum und der Plasmamembran lokalisiert ist und mechanosensorische sowie intrazelluläre Calcium-Signale koordiniert. Polycystin-2 bildet funktionelle Komplexe mit Polycystin-1 und trägt zu zilienabhängigen Signalwegen bei, die die epitheliale Polarität, die tubuläre Morphogenese und die Zellzykluskontrolle über Ca2+-gekoppelte Effektoren regulieren. Eine Störung von PKD2 beeinträchtigt die Calciumhomöostase und nachgeschaltete Signalprogramme, die Proliferation, Differenzierung und Flüssigkeitstransport in renalen und anderen Epithelien beeinflussen. Genetische Veränderungen von PKD2 sind stark mit der autosomal-dominanten polyzystischen Nierenerkrankung assoziiert, wodurch PKD2 einen zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung ziliärer Signalübertragung und zystogenese-relevanter Mechanismen in humanen Zellmodellen darstellt.

Das Polycystin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PKD2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PKD2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PKD2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Polycystin-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PKD2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Polycystin-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PKD2-Exone abzielen, die für die Polycystin-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PKD2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Polycystin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Polycystin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PKD2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Polycystin-2 HDR-Plasmid (h) und Polycystin-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PKD2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PKD2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.