Particules Lentivirales d'Activation (h) Pol III RPC32: sc-417072-LAC

POLR3G code pour RPC32 de la Pol III, une sous-unité centrale de l’ARN polymérase III qui soutient la transcription de petits ARN non codants, notamment les ARNt, l’ARNr 5S et d’autres ARN régulateurs essentiels à la capacité de traduction, à la croissance cellulaire et à la protéostasie. RPC32 contribue à l’assemblage du complexe Pol III et à l’initiation dépendante du promoteur, en s’intégrant à des voies qui couplent la détection des nutriments et la signalisation proliférative à la production biosynthétique. Une activité de la Pol III altérée et une production dérégulée de petits ARN sont fréquemment étudiées dans le contexte de la transformation oncogénique, des réponses au stress cellulaire et de la signalisation de l’immunité innée déclenchée par des espèces d’ARN cytosoliques. POLR3G constitue ainsi un point d’entrée mécanistique pour étudier le contrôle transcriptionnel de la biogenèse des ARN non codants et son impact sur les décisions de destin cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales Pol III RPC32 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de POLR3G dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pol III RPC32 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription POLR3G, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pol III RPC32. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif POLR3G ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.