Partículas Lentivirales de Activación (h) POD-1: sc-402890-LAC

TCF21 codifica el factor de transcripción básico hélice–bucle–hélice POD-1, un regulador determinante de linaje de los programas de diferenciación mesenquimal y estromal. POD-1 modula redes transcripcionales que gobiernan la señalización epitelio–mesenquimal, la remodelación de la matriz extracelular y la morfogénesis de órganos, con efectos posteriores sobre el compromiso del destino celular y la expresión génica específica de tejido. La actividad alterada de TCF21/POD-1 se ha vinculado con vías del desarrollo desreguladas y cambios en el estado de diferenciación relevantes para la fibrosis, las interacciones tumor–estroma y la biología cardiovascular y renal. Como regulador transcripcional endógeno, POD-1 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar el control potenciador–promotor y la función de factores de transcripción dependiente del contexto en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral POD-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TCF21 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral POD-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TCF21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de POD-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TCF21 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.