PMS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422324

Übersicht

Das Mausgen *Pms2* kodiert das Protein PMS2, eine zentrale Komponente des MutLα-Mismatch-Reparaturkomplexes zusammen mit MLH1, der Basenfehlpaarungen sowie Insertions-Deletion-Schleifen korrigiert, die während der DNA-Replikation entstehen. PMS2 steuert eine Endonuklease-Aktivität bei, die die Schritte der Exzision und Neusynthese koordiniert und so die Genomstabilität sowie eine korrekte Signalweiterleitung bei DNA-Schäden unterstützt. Über seine Funktion in der postreplikativen Reparatur und der Aufrechterhaltung der Mikrosatelliten-Integrität ist eine veränderte PMS2-Funktion mit erhöhten Mutationsraten und fehlregulierten Antworten auf Replikationsstress verbunden. In der Forschung wird die Störung von *Pms2* eingesetzt, um Mismatch-Reparatur-Defekte zu modellieren und Mutationsakkumulation, Crosstalk zwischen DNA-Reparaturwegen sowie Checkpoint-Antworten zu untersuchen.

Das PMS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pms2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pms2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pms2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PMS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pms2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PMS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pms2-Exone abzielen, die für die PMS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pms2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PMS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PMS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pms2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PMS2 HDR-Plasmid (m) und PMS2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pms2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pms2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.