Plásmido Doble Nickase (h) PLU-1: sc-403771-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PLU-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PLU-1 (h) y el plásmido de doble nickasa PLU-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KDM5B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLU-1 Anticuerpo (7H3D7): sc-517291
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PLU-1 | sc-403771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PLU-1 | sc-403771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM5B codifica la desmetilasa de lisina de histonas PLU-1 (JARID1B), una desmetilasa de H3K4me3/2 que modula los estados de la cromatina en promotores y potenciadores para regular programas transcripcionales que controlan la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y la diferenciación. A través de su dominio catalítico JmjC y de sus regiones de interacción con la cromatina, PLU-1 coordina la represión epigenética e interactúa con reguladores transcripcionales para moldear los patrones de expresión génica. La actividad desregulada de KDM5B se ha vinculado con proliferación alterada, mantenimiento de la identidad celular y plasticidad transcripcional en múltiples contextos tumorales, lo que la convierte en un nodo clave del control epigenético de vías oncogénicas y del desarrollo. Como enzima modificadora de la cromatina, PLU-1 se estudia con frecuencia en mecanismos de memoria transcripcional, remodelación de la cromatina acoplada a la replicación y estados celulares asociados a la resistencia.
PLU-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KDM5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KDM5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KDM5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KDM5B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.