plexin-B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401840-ACT

PLXNB1は、クラス4セマフォリンの膜貫通型受容体であるプレキシンB1をコードしており、接触依存的なシグナル伝達を統合して、細胞骨格の再編成、方向性をもった細胞遊走、軸索ガイダンスを制御します。プレキシンB1はRhoファミリーGTPアーゼとそれに関連するエフェクターを介してシグナル入力を統合し、アクチンダイナミクス、接着のターンオーバー、細胞極性プログラムに影響を与え、その下流で組織パターニングやバリア構造の形成にも作用します。ヒトの生物学においては、PLXNB1の発現やシグナル伝達の変化が、がんモデルでの運動性の破綻や浸潤性行動と関連づけられているほか、セマフォリン—プレキシン経路が神経回路の結線を形作る神経発生過程とも関係することが示されています。これらの特徴により、プレキシンB1は、セマフォリンシグナル伝達、Rho/ROCKに連動したリモデリング、ならびに細胞—細胞・細胞—細胞外マトリックス相互作用の文脈依存的変化を研究するうえで有用な結節点となります。

plexin-B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLXNB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

plexin-B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLXNB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLXNB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性plexin-B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLXNB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるplexin-B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLXNB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるplexin-B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。