Plasmide Double Nickase (h) PLC γ1: sc-400472-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PLC γ1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PLC γ1 Double Nickase (h) et le plasmide PLC γ1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PLCG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PLC γ1 Antibody (E-12): sc-7290
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PLC γ1 | sc-400472-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PLC γ1 | sc-400472-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLCG1 code la phospholipase Cγ1 (PLCγ1), une enzyme de signalisation proximale aux récepteurs qui hydrolyse le PIP2 pour générer l’IP3 et le diacylglycérol, entraînant la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et l’activation de la protéine kinase C (PKC). PLCγ1 est activée en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs immunitaires, intégrant des signaux qui régulent la prolifération, la différenciation, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire. Cet axe s’articule avec les voies PI3K–AKT et MAPK/ERK et module les réponses transcriptionnelles via des effecteurs dépendants du Ca2+. Une activité dérégulée de PLCG1 a été impliquée dans des contextes de signalisation oncogénique et d’activation aberrante des cellules immunitaires, ce qui souligne sa pertinence pour les études mécanistiques de la transduction du signal.
PLC γ1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLCG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLCG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLCG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLCG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.