Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC δ1 (h): sc-402474

Présentation

PLCD1 code la phospholipase C delta 1 (PLCδ1), une enzyme spécifique des phosphoinositides qui hydrolyse le PIP2 pour générer les seconds messagers IP3 et diacylglycérol, reliant la signalisation des lipides membranaires à la libération intracellulaire de Ca2+ et à l’activation de la protéine kinase C. Par ces voies de sortie, PLCδ1 contribue à la régulation de la dynamique du cytosquelette, de la sécrétion, du trafic membranaire et de l’expression génique dépendante des stimuli dans divers types cellulaires. L’activité de PLCD1 s’inscrit à l’intersection des réseaux de signalisation couplés aux GPCR et aux récepteurs à activité tyrosine kinase, et peut moduler en aval les programmes de transcription dépendants des MAPK et du calcium. Des altérations de la signalisation phosphoinositide/Ca2+ impliquant PLCD1 ont été associées à une dérégulation de la prolifération, de la différenciation et des réponses au stress dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient son étude en signalisation cellulaire et dans des modèles mécanistiques de pathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC δ1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLCD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLCD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLCD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLC δ1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLCD1 pour l'étude de la signalisation de PLC δ1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLCD1 essentiels à la fonction de PLC δ1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLCD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLC δ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLC δ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLCD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLC δ1 plasmide HDR (h) et le PLC δ1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLCD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLCD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.