PLC β2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400984-ACT

O PLCB2 humano codifica a fosfolipase C beta 2 (PLCβ2), uma fosfolipase específica de fosfoinositídeos que acopla a sinalização de GPCRs ativados à produção de segundos mensageiros. A PLCβ2 hidrolisa o PIP2 para gerar IP3 e DAG, promovendo a mobilização intracelular de Ca2+ e a ativação de PKC, que regulam quimiotaxia, desgranulação, produção de citocinas e outras funções efetoras. Essa via se integra às sinalizações de PI3K, MAPK e pequenas GTPases para moldar a remodelação do citoesqueleto e programas transcricionais, particularmente em contextos hematopoiéticos e de células imunes. A atividade desregulada de PLCB2 e a sinalização dependente de Ca2+ têm sido associadas a respostas inflamatórias alteradas e a redes de sinalização oncogênicas, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico para a investigação de vias.

PLC β2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLCB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLC β2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLCB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLCB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLC β2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLCB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLC β2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLC β2 em células tumorais com expressão de PLCB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.