PLC β1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401141

Übersicht

PLCB1 kodiert die Phospholipase C beta 1 (PLCβ1), ein durch G‑Proteine reguliertes Effektorenzym, das Phosphatidylinositol‑4,5‑bisphosphat hydrolysiert und dabei Inositol‑1,4,5‑trisphosphat sowie Diacylglycerol erzeugt. Dadurch werden intrazelluläres Ca2+ mobilisiert und die Signalübertragung über Protein‑Kinase C aktiviert. Dieser Signalweg integriert Eingänge von GPCRs, um vielfältige Prozesse zu regulieren, darunter neuronale Erregbarkeit, synaptische Signalübertragung, Sekretion und Zytoskelettdynamik. Die Aktivität von PLCβ1 trägt zu nachgeschalteten MAPK‑ und calciumabhängigen Transkriptionsprogrammen bei und verknüpft so die Signalübertragung von Membranrezeptoren mit Veränderungen der Genexpression und des zellulären Zustands. Veränderte PLCB1‑Expression oder Signalgebung wurde mit neuropsychiatrischen Phänotypen und aberranter Wachstums‑Kontroll‑Signalgebung in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien der Signaltransduktion und in krankheitsrelevanten Zellmodellen unterstützt.

Das PLC β1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLCB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLCB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLCB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PLC β1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLCB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PLC β1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PLCB1-Exone abzielen, die für die PLC β1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLCB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PLC β1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PLC β1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLCB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PLC β1 HDR-Plasmid (h) und PLC β1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLCB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLCB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.