Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) PLAP: sc-400629-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PLAP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PLAP (h) y el plásmido de doble nickasa PLAP (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ALPP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLAP Anticuerpo (8B6): sc-47691
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PLAP | sc-400629-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PLAP | sc-400629-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El ALPP humano codifica la fosfatasa alcalina placentaria (PLAP), una ectoenzima anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) en la superficie celular que hidroliza monoésteres fosfato y puede influir en la disponibilidad extracelular de nucleótidos y fosfato. La actividad de PLAP se relaciona con la organización de microdominios de membrana y contribuye a procesos como la diferenciación celular, la adhesión y la señalización en la membrana plasmática. ALPP es fisiológicamente prominente en el tejido placentario y también se utiliza como marcador molecular en estudios de expresión ectópica y cambios de estado de linaje en contextos transformados y asociados a células germinales. Los patrones alterados de expresión de ALPP/PLAP se aprovechan con frecuencia para investigar vías vinculadas a la regulación del desarrollo, el tráfico de membranas y las transiciones de estado celular.
PLAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALPP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALPP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALPP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALPP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.