plakophilin 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425181

Descripción general

Pkp3 codifica la plakofilina 3, una proteína con repeticiones armadillo que se localiza en los desmosomas y sostiene la adhesión célula–célula al estabilizar los complejos de cadherinas desmosomales con plakoglobina y al conectar las uniones con la red de filamentos intermedios de queratina. En tejidos de ratón, PKP3 contribuye a la integridad de la barrera epitelial, a la arquitectura tisular y a la resiliencia mecánica bajo estrés. A través de su papel en el ensamblaje de los desmosomas y el remodelado de las uniones, PKP3 se integra con vías que regulan la organización del citoesqueleto, la polaridad epitelial y la señalización dependiente del contacto. La expresión alterada o la deslocalización en las uniones de componentes desmosomales, incluida PKP3, se asocia con fragilidad epitelial y se ha estudiado en contextos de inflamación y progresión tumoral, donde los programas de adhesión y motilidad están desregulados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO plakophilin 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pkp3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pkp3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pkp3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína plakophilin 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pkp3 para la investigación de la señalización de plakophilin 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pkp3 críticos para la función de plakophilin 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pkp3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido plakophilin 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido plakophilin 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pkp3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR plakophilin 3 (m) y el plásmido HDR plakophilin 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pkp3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pkp3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.