Plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m): sc-422275
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- plakophilin 1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique plakophilin 1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: plakophilin 1 Antibody (10B2): sc-33636
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m) | sc-422275 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Pkp1 code la plakophiline 1, une protéine à répétitions armadillo qui constitue un composant central des desmosomes, reliant les cadhérines desmosomales aux réseaux de filaments intermédiaires afin de soutenir l’adhésion intercellulaire des cellules épithéliales et l’intégrité des tissus. Chez la souris, la plakophiline 1 contribue à l’assemblage et à la stabilisation des desmosomes, en coordonnant le remodelage jonctionnel avec l’organisation du cytosquelette et la mécanotransduction. La perturbation de l’adhésion dépendante de PKP1 affecte la formation de la barrière épidermique et la résistance au stress, des processus fréquemment étudiés en biologie de la peau et des épithéliums stratifiés. Comme le dysfonctionnement des desmosomes influence la différenciation, la réponse aux lésions et l’homéostasie épithéliale, Pkp1 est pertinent pour l’étude des pathologies associées à l’adhésion et des réseaux de signalisation des jonctions.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pkp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pkp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pkp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine plakophilin 1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pkp1 pour l'étude de la signalisation de plakophilin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pkp1 essentiels à la fonction de plakophilin 1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pkp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le plakophilin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le plakophilin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pkp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le plakophilin 1 plasmide HDR (m) et le plakophilin 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pkp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pkp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.