PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400358

概要

PRKCEは、ジアシルグリセロールに応答するセリン／スレオニンキナーゼであるプロテインキナーゼCイプシロン（PKCε）をコードしており、GPCR経路や受容体型チロシンキナーゼ経路の下流でシグナルを伝達します。PKCεは、細胞生存、増殖、細胞骨格リモデリング、方向性移動を制御するリン酸化ネットワークの調節に関与し、MAPK/ERK、PI3K/AKT、NF-κB、ならびに焦点接着シグナル伝達で重要な役割を担います。ヒト細胞では、PKCεは小胞輸送やミトコンドリアのストレス応答にも影響し、セカンドメッセンジャーシグナルを代謝適応と結び付けています。PRKCE/PKCεの活性や発現の異常は、がん化形質、治療抵抗性の機構、炎症シグナルの変化と関連づけられており、経路マッピングや機能ゲノミクス研究で一般的な標的となっています。

PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRKCE遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRKCE内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRKCEのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKC epsilonタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKC epsilonシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRKCE欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKC epsilonの機能に不可欠なPRKCEエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRKCEゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRKCE遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKC epsilon HDRプラスミド（h）および PKC epsilon HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRKCEホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRKCE標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。