PKAγ cat Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400874

Descripción general

PRKACG codifica la subunidad catalítica gamma de la proteína quinasa A dependiente de AMPc (PKAγ), una quinasa de serina/treonina que fosforila diversos sustratos para traducir las señales de AMPc en respuestas celulares. Mediante su regulación por las subunidades reguladoras de PKA y las proteínas de anclaje de la A-quinasa, PKAγ ayuda a controlar la compartimentalización de la señalización y modula procesos que incluyen el metabolismo, los programas transcripcionales, la dinámica del citoesqueleto y la actividad de los canales iónicos. Esta actividad quinasa se interconecta con la señalización GPCR–adenilil ciclasa–AMPc y con vías posteriores como la expresión génica dependiente de CREB y la comunicación cruzada con redes MAPK. La desregulación de la señalización AMPc/PKA se asocia con múltiples fenotipos relevantes para enfermedades, como señalización proliferativa alterada, perturbaciones endocrinas y metabólicas y cambios en la excitabilidad neuronal, lo que respalda estudios mecanísticos de la función de PRKACG en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKAγ cat (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRKACG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRKACG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRKACG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKAγ cat.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRKACG para la investigación de la señalización de PKAγ cat, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRKACG críticos para la función de PKAγ cat
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRKACG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKAγ cat CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PKAγ cat CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRKACG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKAγ cat (h) y el plásmido HDR PKAγ cat (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRKACG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRKACG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.