PIWIL2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402211-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PIWIL2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PIWIL2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PIWIL2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PIWIL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PIWIL2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402211-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIWIL2 (PIWI-like RNA-mediated gene silencing 2) ist ein Argonaute-Protein der PIWI-Subfamilie, das piRNAs bindet, um die RNA-Stabilität und epigenetische Zustände zu regulieren, und dabei eine wichtige Rolle in der Entwicklung der Keimbahn sowie bei der Aufrechterhaltung der Genomintegrität spielt. Es ist an der durch den piRNA‑Signalweg vermittelten Repression von Transposons, an posttranskriptioneller Genstilllegung und an chromatinassoziierter Regulation beteiligt und begrenzt dadurch die Mobilisierung transponierbarer Elemente und DNA-Schäden. Eine abweichende PIWIL2-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Zusammenhang mit stammzellähnlichen Programmen, veränderter Zellzykluskontrolle und dysregulierten Small‑RNA‑Netzwerken untersucht. PIWIL2 ist daher relevant für die Erforschung RNA‑gesteuerter Silencing‑Mechanismen, epigenetischer Regulation und von Genomüberwachungswegen in menschlichen Zellen.
PIWIL2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PIWIL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PIWIL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PIWIL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PIWIL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.