Plásmido CRISPR de Activación (h) PITHD1: sc-412754-ACT

El gen humano PITHD1 (también conocido como SOPD1) codifica un pequeño factor asociado al proteasoma que contribuye al control de calidad proteica al favorecer la degradación de sustratos marcados con ubiquitina. Se ha vinculado con la regulación de la función del proteasoma y de las vías de proteostasis celular que configuran las respuestas al estrés y el recambio de proteínas reguladoras de vida corta. A través de su papel en el sistema ubiquitina–proteasoma, PITHD1 es relevante para estudios sobre control transcripcional, progresión del ciclo celular y adaptación al estrés proteotóxico. La desregulación de la proteostasis es una característica común en contextos de investigación sobre cáncer y neurodegeneración, lo que convierte a PITHD1 en un nodo útil para la investigación mecanística de fenotipos dependientes del proteasoma.

PITHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PITHD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PITHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PITHD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PITHD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PITHD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PITHD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PITHD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PITHD1 en células tumorales con expresión de PITHD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.