PiT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422988-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PiT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PiT1 Double Nickase Plasmid (m) e il PiT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc20a1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PiT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422988-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc20a1 del topo codifica il trasportatore di fosfato sodio-dipendente di tipo III PiT1, una proteina di membrana ampiamente espressa che media l’assorbimento di fosfato inorganico per sostenere la sintesi dei nucleotidi, il metabolismo dei fosfolipidi e la bioenergetica cellulare. PiT1 integra la disponibilità di fosfato con la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione di sopravvivenza, ed è stato associato al controllo della proliferazione e alle risposte allo stress in molteplici tipi cellulari. Oltre all’omeostasi del fosfato, PiT1 contribuisce a processi legati alla mineralizzazione e a reti di segnalazione guidate dal fosfato che intersecano vie metaboliche e di sviluppo. La disregolazione del trasporto del fosfato e delle vie associate a PiT1 è rilevante per studi sulla biologia della calcificazione, sul rimodellamento metabolico e su fenotipi proliferativi in sistemi modello pertinenti alle malattie.
PiT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc20a1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc20a1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc20a1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc20a1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.