Plásmido CRISPR de Activación (h) PIK3IP1: sc-402814-ACT

PIK3IP1 (proteína 1 que interactúa con la fosfoinosítido-3-quinasa) es un regulador transmembrana que modula negativamente la actividad de la PI3K de clase I mediante su interacción con la subunidad catalítica p110, limitando así la señalización AKT–mTOR aguas abajo. Al ajustar la salida de la vía de PI3K, PIK3IP1 influye en programas de crecimiento celular, supervivencia, metabolismo y señalización inmunitaria, y puede moldear las respuestas a citocinas y a la estimulación del receptor de antígeno. La alteración de la expresión de PIK3IP1 se ha vinculado con la actividad desregulada de la vía PI3K/AKT observada en diversos contextos inflamatorios y en redes de señalización asociadas al cáncer, lo que la hace relevante para estudios de retroalimentación de la vía y atenuación de la señal. Como freno endógeno de la señalización de PI3K, PIK3IP1 proporciona un nodo útil para diseccionar cómo los reguladores asociados a la membrana controlan las señales proliferativas y de supervivencia.

PIK3IP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIK3IP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PIK3IP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIK3IP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIK3IP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PIK3IP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIK3IP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PIK3IP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PIK3IP1 en células tumorales con expresión de PIK3IP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.