Plásmido Doble Nickase (h) PIEZO1: sc-410555-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PIEZO1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PIEZO1 (h) y el plásmido de doble nickasa PIEZO1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PIEZO1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PIEZO1 | sc-410555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PIEZO1 | sc-410555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIEZO1 codifica un canal catiónico mecanosensible y no selectivo que convierte la tensión de la membrana y el estrés de cizallamiento en entrada de Ca²⁺, lo que permite a las células percibir y responder a estímulos mecánicos. La actividad de PIEZO1 regula procesos como el control del volumen celular, la homeostasis iónica, la remodelación del citoesqueleto y vías de mecanotransducción que influyen en la migración, la adhesión y la señalización endotelial. En contextos hematológicos y vasculares, la señalización de Ca²⁺ mediada por PIEZO1 contribuye a la hidratación y deformabilidad de los eritrocitos y a respuestas dependientes del flujo en células endoteliales. Las alteraciones genéticas y funcionales de PIEZO1 se han vinculado con trastornos de la fisiología eritrocitaria y del desarrollo linfático/vascular, lo que lo convierte en una diana relevante para desentrañar redes de señalización reguladas por mecanismos mecánicos.
PIEZO1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PIEZO1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PIEZO1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PIEZO1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PIEZO1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.