Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASx (h): sc-403954

Présentation

PIAS2 code pour PIASx, une ligase E3 de la SUMO et un corégulateur transcriptionnel qui module la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et la production transcriptionnelle via la SUMOylation. PIASx intègre des signaux issus des voies des cytokines et des facteurs de croissance en régulant des facteurs tels que des membres de la famille STAT, des récepteurs nucléaires aux hormones et des composants de la réponse aux dommages de l’ADN, influençant ainsi la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et des programmes transcriptionnels liés à l’immunité. Par ses rôles dans la modification post-traductionnelle et l’équilibre entre répression et activation transcriptionnelles, PIASx a été associé à des réseaux de signalisation dérégulés observés en biologie du cancer, dans l’inflammation et des phénotypes de réponse au stress. Une activité altérée de PIAS2 peut affecter le maintien du génome et les interactions entre voies, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle et de la fidélité de la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASx (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PIAS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PIAS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PIAS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PIASx.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PIAS2 pour l'étude de la signalisation de PIASx, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PIAS2 essentiels à la fonction de PIASx
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PIAS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PIASx plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PIASx plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PIAS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PIASx plasmide HDR (h) et le PIASx (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PIAS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PIAS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.