Plasmide Double Nickase (h) PI 3-kinase p85β: sc-401991-NIC

PIK3R2 code la sous-unité régulatrice p85β de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) de classe IA, qui stabilise et module les isoformes catalytiques p110 et assure le couplage entre les récepteurs à activité tyrosine kinase activés et les protéines adaptatrices vers la signalisation en aval PI3K–AKT–mTOR. En contrôlant la production de PIP3, la PI 3-kinase p85β influence la croissance, la survie et le métabolisme cellulaires, la dynamique du cytosquelette ainsi que le trafic vésiculaire, en intégrant les signaux issus des voies de l’insuline/IGF et des facteurs de croissance. Une régulation altérée de la voie PI3K est largement impliquée dans la signalisation oncogénique, la dysrégulation métabolique et la fonction des cellules immunitaires, faisant de PIK3R2 un nœud pertinent pour analyser l’architecture de la voie et ses boucles de rétrocontrôle. En contexte de recherche, la perturbation de PIK3R2 permet des études mécanistiques sur l’utilisation des isoformes de PI3K, l’amplitude et la terminaison du signal, ainsi que les interactions (cross-talk) de la voie avec les complexes MAPK et mTOR.

PI 3-kinase p85β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIK3R2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIK3R2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIK3R2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIK3R2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.