PI 3-kinase p110 δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400426-ACT

PIK3CD codifica a subunidade catalítica p110δ da fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) de classe I, um regulador-chave da transdução de sinal a jusante de recetores de antigénio, recetores de citocinas e de determinadas tirosina-quinases recetoras. A PI3K p110δ catalisa a geração de PIP3 para ativar a sinalização AKT–mTOR, moldando o desenvolvimento, a ativação e a sobrevivência dos linfócitos, bem como a reprogramação metabólica, e influenciando a quimiotaxia e o tráfego vesicular através de efetores a jusante. A atividade desregulada de PIK3CD perturba a homeostase imunitária e a sinalização inflamatória, sendo amplamente estudada em contextos como imunodeficiência, autoimunidade e biologia de neoplasias hematológicas. Como nó em redes ligadas a PI3K/AKT, mTOR e NF-κB, a p110δ oferece um ponto de intervenção acessível para dissecar a comunicação cruzada entre vias em modelos celulares relevantes para imunologia e cancro.

PI 3-kinase p110 δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIK3CD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase p110 δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIK3CD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIK3CD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase p110 δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIK3CD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase p110 δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase p110 δ em células tumorais com expressão de PIK3CD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.